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聊城市人民医院 yanjinqiang 苏木素褪色很大的原因不在苏木素上，一定要保证蜡、二甲苯和树胶的质量，其内含的苯甲酸、长链有机酸类残留会逐渐使苏木红铝色靛解离，看上去就成苏木红的淡粉色而没有蓝紫色了；另外组织处理也很重要，要定期换脱水机，脱水机太陈旧，在组织脱水中附加的杂环碳水化合物是不能通过后续处理如脱蜡、酒精取出的，即使DNA提取过程也无法将加乘到染色体的杂质完全去除，这个可看一下换脱水机前、后组织提取的DNA260/230的比值就更客观。再一个苏木素液的冰醋酸不要加的太多，不要低于DNA的等电点PH值不要低于3，按照分子基团反应失去电子为碱的原理，苏木素的PH值高于DNA的等电点，DNA的磷酸集团才可稳定解离与苏木素碱性色靛进行电子反应。酸、碱不光指溶液的PH值，在分子整体反应得、失电子中也有规定：失点子为碱，这就是为啥苏木素液是PH值是酸性，发生的是碱性反应或称其为碱性色靛的原因。
聊城市人民医院 yanjinqiang 我个人感觉有一定道理，我们可以讨论一下
聊城市人民医院 yanjinqiang 我当时的思路是染色后面的试剂残留酸性物质，没有分析出具体原因
桂肿瘤所 黄小七 病理技术每个环节都需要注意的。酸性分化液。酸性染料的残留。也是影响染色的原因。
聊城市人民医院 yanjinqiang 我一直坚持禁止苏木素染液内加冰醋酸，不知道有没有同意我的观点的？
奇 苏木素不是没天过滤，是没天刮一下氧化膜，苏木素一定要过染，可以多分化一下，协和医院病理科的HE片子，很多年都不褪色。
盐城市第一人民医院 赵海鸥 我过去是习惯加的
桂肿瘤所 黄小七 苏木素染料的生动就体现于对他调色的人的心灵手巧。我对多元化染液配制持开放态度。
盐城市第一人民医院 赵海鸥 改良哈瑞氏法
聊城市人民医院 yanjinqiang 做病理技术员就好比厨师一样，好多环节都需要经验，比如苏木素的配置需要注意火候
桂肿瘤所 黄小七 是的
王德田 丁伟老师说的很对，苏木素没有氧化膜就不需要过滤，协和医院病理科的HE片子，100多年了都不褪色，照样清晰。
聊城市人民医院 yanjinqiang 同样苏木素的配置程序有时染色效果差距很大
聊城市人民医院 yanjinqiang 各位同仁你们感觉1000毫升苏木素能染多少张切片为好
奇 的确，苏木素的调色是需要些技巧，大家可以摸索一下。另外每家的苏木素配置的会有一些差异。协和医院病理科1000毫升可以染3000张没有问题，我们就是这样做的。
聊城市人民医院 yanjinqiang 每三天换一次染液
聊城市人民医院 yanjinqiang 每1500--2000张换一次苏木素（500毫升）
聊城市人民医院 yanjinqiang 或者染色时间超过三分钟半就需要换新的苏木素
王德田 @聊城市人民医院yanjinqiang ，要染8……10分钟为好，是退行性染色。
聊城市人民医院 yanjinqiang 染色时间长了非常难难分化
聊城市人民医院 yanjinqiang 个人认为染色能力强的苏木素染液两分钟足够了，
语嫣 关键是苏木素质量，生产苏木素的厂家很重要
语嫣 1分半
王德田 要深染，重分化，多冲水，再返兰，冲水。
聊城市人民医院 yanjinqiang 过长时间的染色会人为的改变组织的PI等电点
王德田 染时间短是不提倡的， 长时间的染色不会人为的改变组织结构和细胞，反而核仁更清晰。
聊城市人民医院 yanjinqiang 蛋白质的等电点会被改变的
王德田 现在都乱了章程，染色8……10分钟是有一定道理的， 蛋白质的等电点不会被改变的。
聊城市人民医院 yanjinqiang 个人感觉只要正负电荷结合染色就回牢固，除非有些酸碱物质的残留才回退色
王德田 @聊城市人民医院yanjinqiang ，千万不要个人感觉，要按照操作规程。
聊城市人民医院 yanjinqiang 好的，谢谢@王德田 老师
聊城市人民医院 yanjinqiang 我保留个人意见
alice @王德田 @奇 ，谢谢王老师李老师，学习了
北京宏泰嘉业 郑科 这是李老师以前教我识别苏木素质量的测试。如他上述。
浙大附一院 阿丁 @聊城市人民医院yanjinqiang 王德田老师说的很对。
浙大附一院 阿丁 你染色时间短，是因为不加冰醋酸，核染色选择性降低，导致核浆共染，分化难度加大。任何一个精典的配方，加什么东西都是有道理的，不是随便想出来的，而我们很多所谓的改良都没有原配方的好。
王德田 @丁伟(浙大附一院) ，丁主任说的[强][强][强]
本案例根据91360病理技术病理沙龙讨论记录整理，需要加群讨论的请加微信号Miss_Puffbaby或病理程晓军（pathology_cxj）申请。
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发表于 2016-5-3 16:52:16
