科普：艾美捷sGAG检测试剂盒实验原理介绍

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硫酸氨基葡萄糖是天然的氨基单糖，是人体关节软骨基质中合成蛋白聚糖所必需的重要成分。氨基单糖可刺激软骨细胞产生具有正常多聚体结构的糖蛋白，抑制某些可损害关节软骨的酶(如胶原酶和磷脂酶A2)，抑制损伤细胞的超氧化物自由基的产生，防止皮质激素及某些非甾体类抗炎药对软骨细胞的损害，减少损伤细胞的内毒素因子的释放。因此在研究过程中对于硫酸氨基葡萄糖的定量检测对于某些疾病的诊断尤为重要。

今天艾美捷给大家带来一款Biocolor公司的专利产品用于检测样本中的硫酸氨基聚糖，这款试剂盒采用常规生化方法，通过标准曲线和比色，可定量分析总硫酸化多糖（氨基聚糖和蛋白聚糖）的含量，亦可测定O端和N端硫酸氨基多糖的比值。主要起作用的是Blyscan染料，它可以特异性的与氨基聚糖和蛋白聚糖上的硫酸多糖组分结合，该方法不适于检测已经降解的硫酸化双糖片段。

sGAG检测试剂盒可检测广泛的蛋白多糖，可检测的氨基多糖包括硫酸软骨素、硫酸角质素、硫酸皮肤素、硫酸肝素，不适合检测包含海藻酸的样品，因为它们含有糖醛酸。该试剂盒也不能对透明质酸定量，但透明质酸并不会对硫酸化氨基多糖的检测产生干扰。细胞培养基中20%的胎牛血清也不会干扰实验。该方法检测灵敏度为5ug，所需时间为1小时。

检测样本：可来自软骨组织、动脉组织、肺组织、皮肤组织、肿瘤组织、细胞核组织提取物、细胞培养液、羊水和尿液

Blyscan检测流程图：

sGAG检测试剂盒实验步骤 ：

1. 绘制标准曲线

2. 待测样品的处理：

取50ul待测样品进行实验。如果反应物在656nm初的吸收峰大于1.5，则对样品进行稀释，待测样样品浓度落入标准曲线中段时，准确度较高。

3. 硫酸氨基聚糖—染料复合物的获得

加1.0ml的Blyscan染料溶液到待测样本中，充分混匀，待不溶物出现，离心，弃上清，则获得紫色的硫酸氨基聚糖—染料复合物

4. 硫酸氨基聚糖—染料复合物中染料的释放

加入1.0ml的染料释放剂，充分混匀。溶解5min以上，使染料充分释放

5. 测定

用分光光度计于波长656nm处测定，或使用colorimeter红色滤光片测定

sGAG检测试剂盒检测结果展示：

(a)0和5ug sGAG和Blyscan Dye，(混合15分钟后)；

(b)混合30分钟，然后离心(注意sGAG-Dye颗粒)；

(c)从管中抽出非sGAG染料，并保留颗粒；

(d)使用Dye Dissociation Reagent从sGAG中释放的染料。

相关科研工具推荐：

货号        名称        规格

B1000        Blyscan? sGAG Assay (Standard Kit Size)        110 assays

B3000        Blyscan? sGAG Assay (Large Economy Size)        440 assays

仅供科研使用，不得用于医疗.

sGAG检测试剂盒已发表文章，超500篇，仅摘录展示部分：

Ahn, G., Min, K., Kim, C., Lee, J., Kang, D., reports, J. W.-S., & 2017 Precise stacking of decellularized extracellular matrix based 3D cell-laden constructs by a 3D cell printing system equipped with heating modules. Nature.com.

Makris, E., & Responte, D. (2014). Developing functional musculoskeletal tissues through hypoxia and lysyl oxidase- induced collagen cross-linking. PNAS 111, E4832 E4841.

Prewitz,M.C., Seib,F.P., von Bonin,M., Friedrichs,J., Sti+ el,A., Niehage,C., M++ller,K., Anastassiadis,K., Waskow,C. and Hoflack,B. (2013) Tightly anchored tissue-mimetic matrices as instructive stem cell microenvironments. Nature Methods 10, 788 794

Song,J.J., Guyette,J.P., Gilpin,S.E., Gonzalez,G., Vacanti,J.P. and Ott,H.C. (2013) Regeneration and experimental orthotopic transplantation of a bioengineered kidney. Nature medicine, 19, 646-651.