IHC抗原修复，你知道不知道的那些事

R-KING

        前辈老师在带教时讲到，做免疫组化那一步...那一步是不能干片的啊。。。可是为什么、为什么不能干片呢？？？                那么我要说的不是这个，而是高压热修复完后，立马取出玻片后干片的那些事...（为了赶时间，这样做的可能就有你:P）。

      查了写资料也看到网上有帖子说干片的影响（图一）。

      
为了验证上述修复完后，立马取片导致干片，我做了如下实验。
实验材料：同一扁桃体组织切片3张、安必平试剂Ki67、其他设备不一一列举了，都懂的。直接上图

图二（低）
图二（中）

图三（低）

图三（中）

图四（低）

图四（中）

      从上面图二和图三，部分有表达，但是表达的部位不同，为何？因为在取出玻片时，有残留修复液在组织上面，所以有修复液的部分最终还是表达，干片的部分是阴性或者弱+。图四表达正常。除了此处不同外，其他参数都相同（H2O2 10min、一抗30min、二抗20min、DAB 3min、复染、透明、湿封）。那么导致结果的原因有哪些呢？？？？


      同样也希望老师们给出解释说明。下有我个人的一些结论：
      分析原因有：1.当组织修复完成后取片，在急剧温度变化的环境中，组织抗原暴露后开始并不稳定，如暴露在空气中后，抗原的蛋白才会发生变化（破坏），抗原破坏后，肯定无法与抗原结合，导致阴性原因；2.当组织高温中修复后，电子活跃度增高，且电子活动范围因为在液体中不会发生变化。突然组织干片，电子活动突然终止（这个我只能想到这方便原因，但是电子内部活动，我没办法验证）

R-KING

自己顶，第一次发帖，有点激动，有错别字，哎，你们都懂的。

看了又看

经验之谈，不错，赞一个。

nikoniko

这个好，谢谢分享

潘静

我想请教老师，现在免疫我们用高压锅修复喷汽两分钟以后，水龙头冲洗表面，然后开盖后立马拿出切片。，

潘静

我想请教老师，现在免疫我们用高压锅修复喷汽两分钟以后，水龙头冲洗表面，然后开盖后立马拿出切片。，

潘静

我想请教老师，现在免疫我们用高压锅修复喷汽两分钟以后，水龙头冲洗高压锅表面，然后开盖后立马拿出切片清洗。这是试剂派来工程师老师指导的。      但是以前做免疫，不是修复完以后要自然复温以后，再拿出来切片用缓冲液洗。我问了好多人，都觉得高压锅修复不能自然复温，会修复过度，为什么，微波炉修复都是自然复温啊， ...