选择线粒体内参抗体这些必备技巧

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细胞色素c氧化酶(Cytochrome c oxidase，简称COX)是一种异源寡聚酶，通常含有13个亚基，定位于线粒体内膜，是线粒体呼吸链的酶复合物。细胞色素c氧化酶中形成催化中心的3个最大的亚基由线粒体DNA编码，其余10个亚基包括COX IV由细胞核内的基因组DNA编码。细胞色素c氧化酶(COX)活性缺陷和人类多种疾病相关。COX IV抗体可用作线粒体蛋白上样量的内参抗体，其检测目标蛋白大小为16kD左右。

什么时候选择线粒体内参抗体？

我们知道，在Western Blotting中使用内参其实就是在WB过程中的另外用内参对应的抗体检测内参蛋白，这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达，由于内参在各组织和细胞中的表达相对恒定，借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。此外使用内参可以作为空白对照，检测蛋白转膜情况是否完全、整个Western Blot显色或者发光体系是否正常。

常用的细胞总蛋白质内参有GAPDH和细胞骨架蛋白β-Actin或β-Tubulin等。对于一些植物的样本，则需要特别的植物Actin蛋白作为内参。当实验样品中只是核蛋白，而不是细胞总蛋白提取液时，可以用组蛋白H（Histone H），或者增殖细胞核抗原（PCNA）等为核内参抗体。而在一些特别的针对线粒体作为微环境的研究课题时，需要提取线粒体总蛋白并检测其中的目标蛋白含量，这时候常规的细胞总蛋白内参就不是很合适，我们推荐使用线粒体总蛋白的内参抗体，对于线粒体蛋白的检测，常用COX IV或VDAC1作为内参抗体，这里面COX IV又是被引用最多的线粒体内参。COX IV的检测分子量大约在16kD左右，比较适合用于检测目标蛋白在较大的WB实验。

我们课题组是做凋亡和线粒体方面研究的，经常研究线粒体方面的通道蛋白，一直使用Abbkine的COX IV抗体来做WB，效价挺高的。——武汉大学生科院一客户

产品名称及描述	品牌	货号	产品说明
Anti-COX IV Mouse Monoclonal Antibody (14Y2)	Abbkine	A01060	详情

小鼠源的单克隆抗体一般在特异性、稳定性以及效价都要优于多克隆抗体。 另外，抗体的效价也是考察该抗体性价比的重要方面，也即相当于实际应用时的稀释比率。一个效价高的100μl COX IV抗体（假如其WB检测的稀释比率是1:4000，最终使用液相当于400ml），要比效价低的1ml的COX IV抗体（假如WB检测的稀释比率是 1:200，最终使用液相当于200ml）性价比更高。因此在选择抗体的时候，不但需要考虑抗体的量，还需要考虑抗体的效价，即不同应用的建议稀释比率。

为什么选择推荐Abbkine品牌的COX IV作为线粒体内参抗体？

供应COX IV抗体的进口品牌有很多，像Abcam、Santa Cruz、Cell Signaling（CST）、Millipore等都有相关COX IV抗体提供。但是由于不是专门的标签和内参抗体供应商，因此在性价比上不是最优的选择， 以Abcam为例，其一支100μl COX IV抗体的RMB报价为￥4418；CST的一支100μl COX IV抗体的报价是￥2997。

另外，一些国内的供货商也能提供分装的COX IV抗体，但是在品牌和质量保障上都有不足。国产分装的COX IV抗体在质量稳定性上有不足，并且经过分装以后，其效价也有损失。而原产于国内实验室的GAPDH抗体有些具有较好的检测活性，但是在应用类型上有差距，并且在批次之间的稳定性上较难控制，而国内仅有的少量原产抗体也是多克隆抗体。如果您想买到一支性价比更高，同时也是原装进口品牌的COX IV线粒体内参抗体，那 Abbkine可能会是您的一个重要考虑选项之一。我们向您推荐Abbkine的COX IV单克隆内参抗体Anti-COX IV Mouse Monoclonal Antibody (14Y2)（货 号A01060）。

产品名称及描述	品牌	货号	产品说明
Anti-COX IV Mouse Monoclonal Antibody (14Y2)	Abbkine	A01060	详情

该COX IV抗体为单克隆抗体，克隆号为14Y2。其抗原为KLH偶联的兼具种属通用型和蛋白特异性的COX IV蛋白部分序列。Abbkine的COX IV单克隆抗体（货号#A02060）产品，其价格比Abcam低65%，只有CST的一半价格。可高效的应用于Western Bloting实验，作为线粒体总蛋白的内参定量。

一个高效价的抗体不仅影响实验结果的灵敏度，还意味着更高的性价比。Abbkine的COX IV线粒体内参抗体在常规的WB实验里，推荐的起始稀释比率为1:1000，实际在Abbkine的应用中，还有1:5,000甚至更高的稀释比率，需要根据客户具体的实验条件进行进行优化。

Abbkine还提供1ml大包装以及更大定制规格的COX IV线粒体内参抗体，非常适合经常进行线粒体领域免疫学检测的实验需求。为方便客户的使用， 上述产品，Abbkine均在中国备有现货。Abbkine针对中国市场，提供全球化的产品质量追踪和售后服务以及保障，如果您在使用过程中有任何问题， 请直接与其当地代理商艾美捷科技有限公司联系。

产品名称及描述	品牌	货号	产品说明
Anti-COX IV Mouse Monoclonal Antibody (14Y2)	Abbkine	A01060	详情

美国Abbkine品牌是一家提供高性价比免疫学和细胞学科研产品及解决方案的品牌，艾美捷将其引入中国，作为其中国区域代理，将为客户提供最具性 价比的常规免疫学试剂，如各种标签抗体、内参抗体、常规一抗以及全系列二抗，抗体检测底物以及相关试剂盒等。同时我们作为多家国际知名品牌的的中国代理或 区域代理，艾美捷能为您提供系列的实验室解决方案。如果您对上述产品感兴趣，请致电免费客户专线400-6800-868到艾美捷科技有限公司垂询相关的产品信息及完整实验解决方案。