Abbkine免疫（共）沉淀实验原理科普

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Abbkine免疫（共）沉淀实验原理
免疫沉淀是基于传统亲和纯化方法开发的，在含有目的抗原的细胞裂解液中加入特定的抗体以及Protein A-Beads（预先将Protein A固定结合在磁珠上），根据抗原与抗体、Protein A与抗体的FC的特异性，形成“抗原-抗体-Protein A-Beads”复合物，清洗离心后去除溶液中未结合的杂蛋白，最终检测是否存在目的蛋白。与传统的柱式亲和纯化相比，免疫沉淀的目标是仅分离足够用于Western Blot或其他检测方法检测的蛋白质。通常可以将已处理和未处理的样品进行比较，从而评估目标蛋白的相对量。

该实验的方法很简单，可以概括为以下几步：

Step1：蛋白样品准备，细胞需提前裂解。


Step2：加样，抗原抗体结合，protein A 琼脂磁珠与抗体结合。


Step3：免疫沉淀分离。


Step4：洗脱蛋白复合物。


Step5：分析检测—Western Blot或者质谱。

免疫沉淀的应用场景
免疫沉淀（IP）一般可用于以下的研究分析：

1.磷酸化位点分析


2.激酶活性分析


3.乙酰化位点发现与鉴定

免疫共沉淀的应用场景
免疫共沉淀（Co-IP）一般可用于以下的研究分析：

1.利用质谱鉴定相互作用蛋白


2.蛋白相互作用的验证


3.缺失分析联合co-IP进行蛋白互作结构域分析


4.测定两种目标蛋白质是否在体内结合


5.确定一种特定蛋白质的新的作用搭档


6.分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物

免疫共沉淀的优点

（1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；


（2）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；


（3）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。

免疫共沉淀的缺点

（1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；


（2）不能判断直接互作还是间接互作，两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；


（3）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择特异的检测抗体，若预测不正确，实验就得不到结果，方法本身具有冒险性。

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注意：Abbkine免疫(共）沉淀实验原理科普知识资料来源于亚科因