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细胞活力检测产品大 PK
常用的细胞活力检测试剂主要有 MTT、CCK8 等检测方法 (图 1)。 MTT法：又称 MTT 比色法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为不溶于水的蓝紫色结晶甲臜 (Formazan) 并沉积在细胞中，但死细胞无此功能，后经 DMSO 溶解，于 490 nm 处测定吸光值便可间接反应细胞活力。但该方法除去操作步骤耗时以外，生成的 Formazan 是不溶于水的，需经 DMSO 溶解后才能检测，增加了工作量的同时仍不能保证测定结果的准确性，且该溶剂对人体具有明显毒性。  科研汪 ：MTT 作为“元老”级别的检测方法，虽然“老练”，Paper 无数，但麻烦是真麻烦，CCK8 法倒是便捷很多！  小 M：那你是还没用过更便捷的...  科研汪 ：莫非你说的是细胞活力检测的“金标准”？  小 M：CTG 细胞活力检测，简单、灵敏、快速的均质检测方法，反应 10 分钟即可得到“Bling Bling”的检测结果，你就说“快不快”？
CTG 发光法：基于高灵敏度生物发光检测技术，通过对三磷酸腺苷 (ATP) 进行定量以测定培养物中活细胞数目及细胞活力。该实验方法可用三个字简单概括 “快、准、狠”，比 MTT 的处理速度快近 20 倍，节省时间近 4 小时。CTG 特有的均质检测法即 “加样-混样-检测”，使用时，只需将本试剂等体积添加至培养细胞中即可进行检测。不用感慨，细胞活力检测为什么不能如此简单？
图 1. MTT、CCK8 与 CTG 法的实验流程图 表 1. MTT、CCK8 与 CTG 法特点比较
CTG，适用于哪些实验
首先，来了解实验 CTG 发光法的测定原理：ATP 作为细胞新陈代谢的一个重要指标，与活细胞数目呈良好的线性关系，是细胞活力检测的重要标志性分子。ATP 生物发光的原理为：荧光素酶以荧光素、ATP 和 O2 为底物，在 Mg2+ 存在时，可将化学能转化为光能；在荧光素酶催化的发光反应中，ATP 在一定的浓度范围内，其浓度与发光强度呈线性关系，即在光信号与酶反应体系中，发光值与 ATP 呈正比，ATP 与活细胞数成正比，CTG 发光法通过 ATP 含量来进行细胞计数或活力测定，且不受化合物自发荧光的影响 (图 2)，是细胞增殖测定，细胞活力测定和细胞毒性高通量筛选分析的理想选择。图 2. CTG 法检测原理 ■ 案例 1：细胞增殖测定 如图 3 所示，为了探究 SIPL1 对 TNBC 细胞增殖的影响，将 SIPL1 表达载体转染至 BT-549 与 MDA-MB-231 细胞， 并使用 CCK8 法与 CTG 法，进行细胞增殖检测。 CCK-8 检测：TNBC 细胞瞬时转染 shRNA 或过表达质粒并培养 24 h 后检测。 CTG 发光细胞活力测定：TNBC 细胞在 37°C 下培养过夜。然后，将 100 µL CTG 溶液直接与培养基混合，在室温下培养 20 分钟。结果显示，转染靶向 SIPL1 shRNAs 的 BT-549 和 MDA-MB-231 细胞系的细胞增殖显著降低 (图 3)。 图 3. SIPL1 对 TNBC 细胞活力的影响[1] CCK-8 (a) 和 CTG 发光细胞活力测定 (b) 用指示载体转导 BT-549 和 MDA-MB-231 细胞增殖能力的分析。
■ 案例 2：细胞活力测定如图 4 所示，为了探究外源 RRM2 是否会影响肝癌细胞的铁死亡，在 HepG2 和 SMMC-7721 细胞中过表达或敲除 RRM2，通过 CTG 法检测其对细胞活力的影响。结果表明，过表达 RRM2 时，细胞活力明显增强，反之，敲除 RRM2 时，细胞活力明显降低[1]。
左右滑动 图 4. 通过 CTG 法测定 RRM2 对细胞活力的影响[2] (a) 在体外表达或敲除 RRM2 的 HepG2 和 SMMC-7721 细胞中测量细胞死亡 (b) 和 4-HNE 水平 (c)，然后再用 Fer-1、ZVAD-FMK、Nec-1 或体外表达的 RRM2 进行进一步处理。细胞活力测定采用 CTG 发光细胞活力测定法。
■ 案例 3：细胞毒性高通量筛选分析如下图所示，作者团队报告了一种基于浓度-反应曲线的表型定量高通量筛选 (qHTS)，旨在识别对疟原虫肝脏和无性血期寄生虫具有活性的化合物 (图 5)。使用 SYBR Green 或荧光素酶来测试对寄生虫生长的抑制，共检测了 456,817 种化合物。 在 qHTS 之后，又分类选择了 4,253 种合成易处理的化合物，用于验证抗疟原虫活性和哺乳动物毒性。在 3 μM 和 1 μM 浓度下对化合物进行体外抗伯氏疟原虫肝期寄生虫的评估。其中使用 CTG 法评估了所有 4,253 种化合物对 HepG2 的细胞毒性。其中 255 种化合物对 HepG2 细胞表现出一定程度的生长细胞毒性，AC50 值 < 43 µM (随后被排除)。最终筛选出 994 种经过验证的无毒性化合物，用于针对肝阶段寄生虫的后续评估。 图 5. 针对恶性疟原虫无性血期寄生虫的定量高通量筛选[3]。 CTG “得宠” 理由汇总
图 6. MCE CTG Cell Viability Detection Reagent 与同类产品（竞品）对比测试结果 a. 产品发光稳定性测试（293T 细胞)；b. 不同细胞数的线性范围比较 (293T 细胞)；c. 不同细胞系的检测结果比较 (293T、H4IIE、Jurkat 细胞)
对比测试结果表明：持续 3 h 的生物发光稳定性的检测中，MCE CTG Cell Viability Detection Reagent 的发光信号值比较稳定 (图 5a)；不同细胞数的线性范围中，MCE 产品线性关系良好，与进口 竞品线性几乎一致 (图 5b)；且对于不同细胞系，MCE 产品与进口竞品检测信号值相当 (图 5c)。综上检测结果表明，MCE CTG 试剂盒可实现稳定、灵敏、批次间差异较小的不同细胞系的细胞活力检测。 表 2. MCE CTG Cell Viability Detection Reagent 产品特性 靠谱的细胞活力 CTG 检测试剂，尊贵的 VIP 客户体验，想发 SCI 深梦呓语的心。无需按捺您的“蠢蠢欲动”，小 M 早已备好你想要的试用装 (试用装链接)。体验不收费，时间最宝贵~ 快快申领吧！ 实验小 Tips，附上 CTG 使用注意事项，希望你能早日发 SCI 啦。 1. 荧光素酶的活性对温度较为敏感，反复冻融会致其逐渐失活，建议分装冻存，避免反复冻融。冻融时，可能会导致试剂中出现少量沉淀，可平衡至室温后观测沉淀溶解情况，如仍有残留，可离心后去除。
2. 本产品在使用或分装时所使用耗材应注意避免 ATP 污染。
3. 若待测药物的溶剂含量较高，荧光素酶反应可能会被干扰，致化学发光信号受到影响，可设置含有溶剂的细胞培养液的对照孔以排除此干扰。
4. 检测时需使用适合于细胞培养的白色或黑色的多孔板 (96 孔板或 384 孔板)，普通透明多孔板的相邻孔之间可能会产生相互干扰。如使用透明板，可使用不透明的白色胶带粘贴孔底。
5. 建议在避光环境下进行荧光检测。
6. 由于整个发光反应非常迅速，建议加入 CTG 试剂孵育 10 分钟后，立即检测荧光。
M CE 的所有产品仅用作科学研究或药证申报，我们不为任何个人用途提供产品和服务 参考文献 1. Juanjuan He, Jing Wang, et al. SIPL1, Regulated by MAZ, Promotes Tumor Progression and Predicts Poor Survival in Human Triple-Negative Breast Cancer. Front Oncol. 2021 Dec 17;11:766790.
2. Yueyue Yang, Jiafei Lin, Susu Guo, et al. RRM2 protects against ferroptosis and is a tumor biomarker for liver cancer. Cancer Cell Int. 2020 Dec 7;20(1):587.
3. Dorjbal Dorjsuren, Richard T Eastman, et al. Chemoprotective antimalarials identified through quantitative high-throughput screening of Plasmodium blood and liver stage parasites.Sci Rep. 2021 Jan 22;11(1):2121.
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