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在选择重组蛋白产品进行功能研究时，是否会担心你的检测可行呢？除了在实验设计上“下功夫”，选择已通过生物活性验证的产品更是给足了“安全感”！MCE 重组蛋白产品活力爆棚！高纯度，高活性，为您的实验保驾护航！
为了保证重组蛋白产品的生物活性，MCE 建立了数种基于细胞实验的测活方法进行检测，这些方法主要包括：细胞增殖实验、细胞毒性实验、细胞粘附实验、趋化试验、细胞因子产生实验、细胞分化实验等。
细胞增殖实验，在分子生物实验中非常重要，它是评价细胞生长、代谢和活力状况的重要指标。常用的方法包括基于细胞活力检测的 MTT 检测法和 CCK8 检测法等。 许多细胞生长因子 (如 EGF、bFGF 和 VEGF 等增殖因子) 与细胞增殖、分化和存活相关，其作用是通过结合细胞表面的跨膜受体，刺激受体的内在蛋白质 (酪氨酸激酶) 活性，引发下游信号通路级联反应，使细胞内发生各种生化变化，比如增加细胞核中的转录反应等，最终导致细胞增殖。基于这种功能，我们选择细胞增殖实验来表征和验证这类蛋白质的生物活性。
     细胞毒性实验，主要评价细胞损伤、细胞生长、细胞代谢变化的情况，常用的检测方法也是基于细胞活力的 CCK8 检测法。炎性因子 TNF-α 作为肿瘤坏死因子超家族的成员，是免疫系统细胞 (活化的单核/巨噬细胞等) 在急性炎症过程中产生的炎症细胞因子，可以与细胞表面的几种不同受体结合 (主要的 TNF-α 受体是 TNFR1 和 TNFR2)，通过介导细胞存活和细胞凋亡信号转导来参与免疫系统的发育和正常功能[1][2]。 基于 TNF-α 诱导细胞凋亡的功能，我们建立细胞毒性实验来是很好的检测方法。用放线菌素 D 处理肿瘤细胞 (如小鼠成纤维细胞株 L-929) 可明显增强 TNF-α 杀伤肿瘤细胞的活性。
细胞粘附实验，主要用于细胞粘附因子 (CAM) 等重组蛋白的功能验证，常用的检测方法根据细胞的黏附性原理，将待测样品包板，加入细胞培养后洗去未粘附或粘附能力弱的细胞，用 CCK8 试剂盒检测显色程度，推算粘附的细胞数，从而反映待测样品的活性。
   
细胞趋化实验主要用于趋化因子家族 (CXC 和 CC 趋化因子家族等) 以及其他具有趋化活性的蛋白活性检测。目前该实验常用 Transwell 小室检测法，如下图，将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，通过对穿过膜的细胞进行计数，得出细胞的趋化性结果。图 1. Transwell 小室检测原理图[3]。 常用分子生物学测定法 (qRT-PCR)，也称为报告基因法，通过检测细胞内细胞因子的基因或 mRNA 的量，推算出细胞因子的产生量。 碱性磷酸酶 (alkaline phosphatase, ALP) 在大多数细胞类型中均有表达，但其在具有更新、分化潜能的细胞中呈高水平表达。通过 ALP 活性测定来评估生长分化因子、骨形态发生蛋白等对细胞分化和增殖的影响。
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参考文献：
[1] Locksley R M, Killeen N, et al. “The TNF and TNF receptor superfamilies: integrating mammalian biology.” Cell, 2001, 104(4): 487-501. [2] Ciebiera M, Włodarczyk M, et al. “The Role of Tumor Necrosis Factor α in the Biology of Uterine Fibroids and the Related Symptoms.” Int J Mol Sci. 2018 Dec 4;19(12):3869. [3] Justus, C.R., Marie, M.A., et al. “Transwell In Vitro Cell Migration and Invasion Assays.“ Cell Viability Assays. Methods in Molecular Biology, 2023, vol 2644. Humana, New York, NY.
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