突破！TIL细胞胞免疫疗法第一例针对Ras突变体的肠癌治疗成功！

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这是第一个靶向Ras突变体治疗肿瘤成功的案例，将不可能变为了可能，十分振奋人心。就连CAR-T先驱Carl June也在同期NEJM上写了一篇题为“Druggingthe undruggable Ras— Immunotherapy  tothe Rescue”的文章，盛赞这一突破性成果。

这项针对KRAS突变的免疫疗法属于TIL细胞疗法的范畴。TIL细胞疗法是免疫疗法的一种，这些年正在逐步发展，它最初的提出者就是Rosenberg。TIL(Tumorinfiltrating lymphocytes)指肿瘤浸润的淋巴细胞。在手术切除的肿瘤组织中，大部分是肿瘤细胞，也有少部分淋巴细胞。这些淋巴细胞中有部分是针对肿瘤特异性突变抗原的T细胞，是能够杀伤肿瘤细胞的，但是由于一些原因(比如肿瘤微环境和PD-1)，他们的功能受到了抑制，不能在肿瘤组织中有效的杀伤肿瘤细胞。但是，科学家通过一些体外培养方法把这些肿瘤组织中的某类型的淋巴细胞富集起来，再回输给患者，就能够发挥抗肿瘤作用，而且联合PD-1效果会更好。
我们都知道以PD-1抗体和CAR-T技术为代表的肿瘤免疫治疗已经创造了很多奇迹。而该项免疫疗法研究成果中只有一个病例，却能在医学顶级杂志上发表，足见其重大价值。Steve Rosenberg研究组这项TIL细胞疗法的最大意义在于证明了TIL细胞疗法对KRAS突变的患者有效果，这可能会让非常多的KRAS突变患者获益。

以下是该项研究的主要内容
从转移性结直肠癌患者肿瘤浸润淋巴细胞中分离出以KRAS 突变体G12D为靶点且为HLA-C*08:02限制性的多克隆CD8 +T细胞，它们由四种不同的T细胞亚型组成。体外培养到1.11×1011数量级后回输病人体内，7个肺部的转移灶在几周后都变小乃至消失，9个月之后发现其中一个肿瘤转移灶又复发了。该部位肿瘤经手术切除，遗传学分析发现这个肿瘤组织中编码HLA-C*08:02的基因已经缺失了。因此判断，这种CD8 +T细胞介导的免疫疗法只对表达KRAS G12D突变和HLA-C*08:02的肿瘤有效。


细胞治疗主要过程

实验方法：
1.分离出的T细胞的功能鉴定与扩增。测试从患者获得的肿瘤浸润淋巴细胞是否能够识别转移性肺肿瘤表达的体细胞新表位。将这些细胞在细胞回输前2周进行快速扩增程序。

2.体内跟踪T细胞克隆。分别从治疗前的三个肺结节上、进展性病变部位和T细胞输入前后的外周血中，分离出病人治疗用的T细胞，测定基因组上的T细胞受体β链的可变区序列，从而测定对G12D突变体有反应的T细胞受体的频率。

3.评估T细胞受体的反应性。

4.染色体拷贝数分析。以正常样品作为参考，使用Sequenza软件以确定肿瘤染色体拷贝数中的畸变。按文中附录中方法确定肿瘤HLA-C等位基因的频率。

实验结果：
1.临床评价。在细胞治疗后40天里，所有的七个肺转移灶的CT扫描都在恢复正常。其中6个肿瘤部位在治疗后的9个月完全康复或者不断恢复健康。患者在从白细胞介素-2的作用恢复之后没有不良反应，在接受细胞治疗后的2周就出院了。约9个月的时候，对唯一一个复发的病灶和另一个已经恢复健康的病变部位进行了左下肺的VATS切除，其中恢复健康的组织切片的病理分析结果（用苏木精和曙红染色进行）显示没有活的肿瘤细胞。
2. 体内与KRAS G12D反应的CD8 + T细胞频率。输注液中含有至少四种对G12D突变体有反应性的T细胞克隆型。对KRASG12D具有反应性频率最高的T细胞分别占据细胞回输输液袋的49.5％，19.1％和6.9％。这些类型的T细胞在细胞治疗前1周患者的外周血都没有检测到（频率，<0.0002％）。在细胞治疗后40天，在血液中未检测到输液中含量最多的一种T细胞，而在该时间点已经检测到其余几种KRASG12D反应性T细胞。在细胞治疗后约9个月时，在外周血中治疗所用的T细胞分别占所有外周血T细胞的10.4％，4.5％和0.005％，其中数量最多的的T细胞亚型是TRBV10-02突变体KRASG12D反应性T细胞。而相对于外周血，在进展性肿瘤中似乎没有对KRAS G12D反应性T细胞克隆的富集。
3. KRAS G12D-反应性T细胞受体的特异性和灵敏度。
4. 肿瘤的遗传分析。全外显子组和转录组测序显示，唯一一个复发的进展性病变的肿瘤细胞仍然表达KRASG12D突变。然而，染色体拷贝数分析显示该进展性病变存在几种与其它6个病灶不同的遗传异常，其中包括6号染色体上拷贝数中性丢失。编码HLA-C* 08：02等位基因的6号染色体的拷贝丢失，导致HLA限制性原件的缺失，而HLA限制性是T细胞识别KRASG12D突变所必须的，这可能是7个转移灶中唯一一个复发的肿瘤病变区发生免疫逃逸的机制。

研究中的主要结果
这种治疗面临的主要挑战是患者肿瘤的特异性。尽管KRAS G12D突变在胃肠癌中很普遍，但限制性的HLA等位基因仅存在于大约10％的群体中。即使如此，Tran和同事的计算表明，在美国每年有上千名患者可能会符合此疗法的要求。科学家们需要研究其他的HLA等位基因是否能有相同作用，以扩大符合这种治疗条件的患者的人群。或者可以利用合成生物学的工具设计在多种HLA等位基因作用下均能与突变型Ras肽结合的人工受体。这种方法未来很有可能可以治疗多种癌症。