胶原蛋白检测试剂盒实验步骤及胶原蛋白检测试剂盒相关科研工具科普

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胶原蛋白是细胞外基质和结缔组织中含量zui丰富的不溶性蛋白质。它可以在皮肤，肌腱，骨、软骨、肌肉、玻璃体和韧带等组织。有超过16种特征鲜明的类型胶原蛋白，但I型、II型和III型胶原蛋白在哺乳动物中的含量超过80%。本篇文章艾美捷将主要对胶原蛋白检测试剂盒的实验步骤以及胶原蛋白检测试剂盒相关实验工具进行简单介绍。

一、胶原蛋白检测试剂盒实验步骤

1、样品制备：组织或蛋白质/肽样品：组织样品（即肺）应在ddH2O中均匀化，使用100µl。每10 mg组织使用ddH2O。向100µl样品匀浆中添加100µl浓HCl（~12 M，未提供），并将其放入一个压力合适的聚丙烯螺旋盖小瓶中。在120°C下水解样品3小时（见注释C）。尿液：用等量水水解样品压力密封聚丙烯螺旋盖小瓶中12m浓HCl（即100µl尿液+100µl HCl）的体积。之后均质，通过添加4 mg活性炭，用活性炭澄清样品。以10000 x g的速度旋转并离心3小时至少清除沉淀和活性炭。如果需要，重复上述步骤。将2-30µl各水解样品转移至96孔板中，并通过在热板/干热块或微孔板培养箱上70°C加热板蒸发至干燥。

2、标准品制备：将25µl胶原蛋白I标准品转移到一个带螺丝帽的压力密封聚丙烯小瓶中，并添加25µl胶原蛋白12 M浓盐酸（未提供）。牢固拧紧盖并在120°C下水解3小时。在冰上冷却小瓶，然后旋转小瓶内容物（zui终体积为50µl，zui终浓度为1 mg/ml水解胶原蛋白）。添加0、2、4、6、8和10µl的1mg/ml水解I型胶原标准溶液放入96孔板中的一系列孔中，生成0、2、4、6、8和10的当量µg胶原蛋白/孔。通过在热板/干热块上70°C加热板，将标准曲线井蒸发至干燥，或微孔板培养箱。注：为防止微孔板塑料翘曲/蚀刻，请勿将微孔板暴露在J端温度（>85°C）下。如果天气炎热使用平板/烤箱时，我们建议将微孔板放置在70°C下，直到内容物完全蒸发

3、反应：向每个样品和标准品中添加100µl氯胺T试剂，并在室温下培养10分钟。添加向每个孔中加入100µl DMAB试剂，并在60°C下培养90分钟。

4、测量：将板从热源上取下，并在560处测量所有样品和标准曲线孔的吸光度端点模式下的nm（OD560）。对于zui大信号强度，在将板从加热炉中取出后20分钟内测量吸光度

5、计算：对于胶原蛋白标准曲线，从所有标准中减去零标准（0μg/孔试剂空白）读数，绘制背景减去值并计算标准曲线的斜率。对于测试样品，减去零从样品读数中读取标准（0μg/孔试剂空白），并将背景减去的OD560值应用于标准曲线，以在井中获得Bμg胶原蛋白。

二、胶原蛋白检测试剂盒相关科研工具介绍（艾美捷/BioVendor）

以上就是对胶原蛋白检测试剂盒的相关科普，资料来源于艾美捷科技。