小 M 带你攻略细胞转染 - MedChemExpress

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转染 (Transfection): 是借助一定手段人工引入外源核酸 (DNA 或 RNA) 进入细胞的过程。转染目的: 是特异性增强或抑制转染细胞中外源基因表达。

转染的分类

转染类型: 根据在宿主细胞表达时间长短，分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染中，外源基因没有整合到基因组上，仅存在于游离载体，短时间内可获得基因表达产物。稳定转染中，外源基因整合到了基因组，可长期稳定地获得目的蛋白。

图 1. 瞬时转染和稳定转染[1]

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转染方式：根据外源核酸进入细胞的方式，转染方式主要有 3 种：化学方法、物理方法和生物方法。具体特点如下表所示：

由于阳离子聚合物法操作简单，转染效率高，一般是科研用户的常客。所以小 M 给大家介绍细胞转染过程中，阳离子聚合物转染的原理和操作步骤。

阳离子聚合物法

图 2. 阳离子聚合物法转染原理[2]

转染试剂与外源核酸形成阳离子聚合物，胞吞到细胞，最终导致基因产物“蛋白”的产生

优点: 与其他方法相比，对多种常用细胞具有高水平转染效率；对原代细胞和难转染细胞也具有较好的效果；高效低毒、操作简便、重复性好。操作步骤1. 使用完全生长培养基将细胞按照一定细胞密度，铺板于 96 孔细胞培养皿中，100 μL/well，于 37℃，5% CO2 细胞培养箱中，过夜贴壁生长；
2. 当细胞密度达到 70-90% 时，吸去原培养基，并加入无菌 PBS 缓冲液洗涤 2 次 (贴壁性较差的细胞，可省略此步骤)。加入无血清培养基 80 μL/well；3. 96 孔板通常转染 0.25 μg/20 μL/well DNA 进行转染。根据 DNA (μg)：转染试剂 (μL)= 1：3 比例制备转染试剂/ DNA 无血清培养基复合物，轻轻混匀，室温静置 15 min。

具体每孔转染试剂、DNA 及培养基用量如下表所示：

4. 按照 20 μL/ well 加入试剂- DNA/RNA 混合物，进行转染。于 37℃ 5% CO2 细胞培养箱中继续培养 24-48 h (根据实验需求，可以调整转染时间为 24-96 h)；有必要时在转染 6 h 更换为含血清培养基。
5. 使用报告基因检测方法或在基因和蛋白水平对转染效率进行检测。

图 2. 转染步骤及转染效率检测

采用 MCE PolyFast 转染试剂 (HY-K1014)，将外源基因瞬时转染到细胞。转染 24-48 小时，通过荧光实验评价转染效率。结果显示：在 293T 细胞中，RFP 阳性细胞比例高达 95%；在 BHK-21 细胞中，与竞品公司转染试剂比较，MCE PolyFast 转染试剂存在明显优势。

Tips: 在荧光实验过程中，可以适当加入抗荧光淬灭剂 (HY-K1042)，缓解各种荧光染料的荧光淬灭，辅助转染效率的荧光检测。

跟着小 M 已经了解阳离子聚合物在细胞转染中的应用，您现在是否也想应用在自己的实验中呢？下面就让小 M 带你浏览下 MCE 细胞转染相关产品吧！

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参考文献

[1] Kim TK, Eberwine JH. Mammalian cell transfection: the present and the future[J].Anal Bioanal Chem. 2010 , 397(8):3173-8.
[2] Fus-Kujawa A, Prus P, Bajdak-Rusinek K, Teper P, Gawron K, Kowalczuk A, Sieron AL.An Overview of Methods and Tools for Transfection of Eukaryotic Cells in vitro[J].Front Bioeng Biotechnol. 2021 , 9:701031.