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IHC抗原修复,你知道不知道的那些事

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初来乍到

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发表于 2016-1-29 16:57:55 | 显示全部楼层 |阅读模式

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        前辈老师在带教时讲到,做免疫组化那一步...那一步是不能干片的啊。。。可是为什么、为什么不能干片呢???                那么我要说的不是这个,而是高压热修复完后,立马取出玻片后干片的那些事...(为了赶时间,这样做的可能就有你:P)。

      查了写资料也看到网上有帖子说干片的影响(图一)。
1.png
      
为了验证上述修复完后,立马取片导致干片,我做了如下实验。
实验材料:同一扁桃体组织切片3张、安必平试剂Ki67、其他设备不一一列举了,都懂的。直接上图
1.jpg
图二(低) 2.jpg
图二(中)
3.jpg
图三(低)
4.jpg
图三(中)
5.jpg
图四(低)
6.jpg
图四(中)

      从上面图二和图三,部分有表达,但是表达的部位不同,为何?因为在取出玻片时,有残留修复液在组织上面,所以有修复液的部分最终还是表达,干片的部分是阴性或者弱+。图四表达正常。除了此处不同外,其他参数都相同(H2O2 10min、一抗30min、二抗20min、DAB 3min、复染、透明、湿封)。那么导致结果的原因有哪些呢????


      同样也希望老师们给出解释说明。下有我个人的一些结论:
      分析原因有:1.当组织修复完成后取片,在急剧温度变化的环境中,组织抗原暴露后开始并不稳定,如暴露在空气中后,抗原的蛋白才会发生变化(破坏),抗原破坏后,肯定无法与抗原结合,导致阴性原因;2.当组织高温中修复后,电子活跃度增高,且电子活动范围因为在液体中不会发生变化。突然组织干片,电子活动突然终止(这个我只能想到这方便原因,但是电子内部活动,我没办法验证)
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 楼主| 发表于 2016-1-29 17:07:26 | 显示全部楼层
自己顶,第一次发帖,有点激动,有错别字,哎,你们都懂的。
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发表于 2016-1-29 20:35:33 | 显示全部楼层
经验之谈,不错,赞一个。
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发表于 2016-2-17 17:33:37 | 显示全部楼层
这个好,谢谢分享
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发表于 2021-4-10 17:47:02 来自手机 | 显示全部楼层
我想请教老师,现在免疫我们用高压锅修复喷汽两分钟以后,水龙头冲洗表面,然后开盖后立马拿出切片。,
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发表于 2021-4-10 17:47:02 来自手机 | 显示全部楼层
我想请教老师,现在免疫我们用高压锅修复喷汽两分钟以后,水龙头冲洗表面,然后开盖后立马拿出切片。,
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发表于 2021-4-10 17:50:19 来自手机 | 显示全部楼层
我想请教老师,现在免疫我们用高压锅修复喷汽两分钟以后,水龙头冲洗高压锅表面,然后开盖后立马拿出切片清洗。这是试剂派来工程师老师指导的。      但是以前做免疫,不是修复完以后要自然复温以后,再拿出来切片用缓冲液洗。我问了好多人,都觉得高压锅修复不能自然复温,会修复过度,为什么,微波炉修复都是自然复温啊, ...
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