荧光原位杂交技术检测乳腺癌HER2基因发现CEP17信号缺失一例

阳光56

患者女，68岁。因半个月前无意中发现右侧乳腺上方肿块，于2013年5月27日就诊于浙江省台州恩泽医疗中心(集团)台州医院院区手术治疗。既往有高血压病史10年，血压控制可。体检：双乳大小对称，无乳头内陷、溢液，右乳上方2点距离乳头1.0 cm处可及2.5 cm大小肿块，质中偏硬，表面尚光滑，活动可，无压痛，局部皮肤无红肿，无酒窝征及橘皮样改变，右侧腋下淋巴结未及肿大。5月29日在全麻下行乳腺癌改良根治术，完整切除乳腺、胸大肌筋膜、腋窝及胸大小肌间淋巴脂肪组织。

病理检查：送检乳腺改良根治标本，肿块大小6.0 cm×5.0 cm×2.5 cm，切面灰白，质硬，界不清。腋下淋巴结47枚。镜下观察：组织学类型为浸润性导管癌；组织学分级Ⅲ级；核分裂象16/10 HPF；32枚腋下淋巴结发现转移。免疫组织化学(IHC)：雌激素受体(ER)强阳性表达，孕激素受体(PR)弥漫阳性表达，HER2蛋白3＋，E-cadherin及p120阳性表达，COX2＋＋，EGFR、CK5/6、CK14阴性，Ki-67阳性指数为50%。荧光原位杂交(FISH)检测：浸润癌细胞中HER2基因成簇扩增，而第17号染色体计数探针(CEP17)在HER2基因扩增的细胞中均无信号，在HER2无扩增细胞中信号正常([url=]图1[/url])。同批次的其他病例检测结果中第17号染色体均信号正常。经重复检测，结果均未改变。肿瘤细胞中TOP2A基因有小幅扩增，其他细胞中信号正常([url=]图2[/url])。

图1

HER2基因FISH检测结果，HER2基因信号为红色，CEP17信号为绿色，HER2基因成簇扩增的细胞中CEP17缺失，而HER2基因无扩增的细胞CEP17显示正常　FISH×1 000

图2

TOP2A基因FISH检测结果，TOP2A基因信号为红色，CEP17信号为绿色，大多数浸润癌细胞中TOP2A基因有扩增，其中CEP17缺失，而TOP2A基因无扩增的细胞CEP17显示正常　FISH　×1 000

病理诊断：(右侧)乳腺浸润性导管癌(Ⅲ级)伴淋巴结转移。

讨论：

HER2是定位于人染色体17q12-21.3的原癌基因，编码一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜生长因子受体，该受体蛋白与HER家族成员及其配体之间相互作用，通过信号转导调节细胞生长、分化和增殖[[url=]1[/url]]。目前，很多医院都采用IHC和FISH两种方法检测乳腺浸润性癌HER2基因是否扩增，从而指导临床是否对患者进行靶向用药。其中，FISH技术被认为是目前检测HER2基因是否扩增的"金标准"。在HER2的FISH检测中，我们通过计算30个肿瘤细胞中HER2信号总数和CEP17信号总数的比值来判断HER2基因是否扩增，因此第17号染色体数是评判HER2基因是否扩增的重要因素[[url=]2[/url]]。第17号染色体一般可根据CEP17信号数分为单倍体、二倍体和多倍体，染色体多体是癌细胞普遍存在的遗传学特征之一，但在本例中，该信号却缺失。

据报道，有少数乳腺癌患者发生第17号染色体倍体性改变，这种倍体多样性可能是导致IHC和FISH结果不同的因素之一[[url=]3[/url],[url=]4[/url]]。HER2基因扩增以及第17号染色体倍体改变的检测不仅有助于乳腺浸润性癌分子靶标的诊断，而且有助于患者预后的相关监测[[url=]5[/url]]。本例在HER2基因成簇扩增的乳腺癌细胞中CEP17显示缺失的情况较为少见。我们使用的HER2 DNA探针试剂盒中，染色体计数探针CEP17是一种由Spectrum Green直接标记的荧光DNA探针，能特异性地识别第17号染色体的着丝粒部位17p11.1-q11.1，用于重复检测的CEP17之一，标记的也是17p11.1-q11.1，另一探针标记的是17p12中D17S122区，探针长约480 kb。3种探针检测结果均一致，提示有以下可能：第1种是这些肿瘤细胞中第17号染色体丢失，但HER2基因还有保留并扩增；第2种是第17号染色体着丝粒区发生了较大的变异，比如重排、缺失，以致CEP17探针无法很好的结合。我们用FISH方法检测了同位于第17号染色体的TOP2A基因。TOP2A是拓扑异构酶Ⅱ的α亚基，是蒽环类药物的主要作用靶点，其编码基因位于17q21-q22，较HER2基因离着丝粒部位更远，提示本例第17号染色体完全丢失的可能性较小，而着丝粒区发生重大的变异或缺失的可能性较大。

近年来，有很多报道证实HER2基因FISH检测中出现的大多数CEP17多体现象并非真正的"第17号染色体多倍体"，而仅仅是着丝粒局部的扩增或重排，并不能代表整条第17号染色体多体[[url=]4[/url],[url=]6[/url],[url=]7[/url],[url=]8[/url]]。目前关于第17号染色体着丝粒区缺失或者大范围突变的报道很少，Herrera等[[url=]9[/url]]采用FISH检测38例原发性实体瘤，观察到7例存在极少数细胞CEP17完全缺失，其中有1例CEP17缺失率14%，而本例CEP17缺失率达到90%以上。Moelans等[[url=]7[/url]]用多重连接探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification)技术检测111例乳腺癌患者，发现1例患者17p丢失但着丝粒区还在的情况，显色原位杂交检测结果未见异常。Gunn等[[url=]10[/url]]用比较基因组杂交(comparative genomic hybridization)技术发现了4例第17号染色体着丝粒缺失的情况，其中3例均是2条染色体中其中1条17p丢失(包括着丝粒区)，不属于真正的染色体缺失，另外1例则是完全的第17号染色体单体。本例CEP17信号丢失，有可能是仅代表CEP17着丝粒区域的缺失或变异，而非第17号染色体的完全缺失，我们将进一步用测序或者比较基因组杂交方法验证。

虽然FISH检测说明书上明确指出："不要对没有信号或仅含1种颜色信号的细胞核进行计数。仅计数至少每种信号有1个或多个信号的细胞核。"但遇到肿瘤细胞确实检测不到CEP17的特例，我们需要结合免疫组织化学进行判断；若恰好碰到该肿瘤细胞中平均HER2信号数/细胞<6个的情况，HER2的扩增状态就无法确定，可能还需要结合比较基因组杂交技术或多重连接探针扩增技术等方法帮助确定[[url=]7[/url],[url=]8[/url]]。

来源：

[url=]徐伟铭[/url] [url=]张玲娜[/url] [url=]虞义建[/url]

中华病理学杂志, 2016,45(05): 352-353