Western Blotting细胞核内参抗体的选择

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增殖细胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen简称PCNA）由Miyachi等于1978年在 SLE（系统性红斑狼疮）患者的血清中首次发现并命名，因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名。PCNA是一种分子量为36KD的蛋白质，在细胞核内合成，并存在于细胞核内，为DNA聚合酶的辅助蛋白。由于其在细胞核内稳定表达，因此其抗体被广泛应用于细胞核蛋白的内参抗体。

如何选择合适的细胞核内参抗体？

常用的细胞总蛋白质内参有GAPDH和细胞骨架蛋白β-Actin或β-Tubulin等。对于一些植物的样本，则需要特别的植物Actin蛋白作为内参。当实验样品中只是核蛋白，而不是细胞总蛋白提取液时，可以用组蛋白H（Histone H），或者增殖细胞核抗原（PCNA）等为核内参抗体。除了这些，其它常见的核蛋白内参还有K70, K80, Lamin A和B，在一些文献报道中，Erk2、TATA binding protein（TBP）以及c-Jun、c-Fos等都有使用。但是需要注意的问题是核蛋白内参的选择需要考虑实际的试验环境，比如在涉及细胞增殖相关试验中，c-Jun由于自身表达变化就不适合做内参；而在凋亡实验时，TBP、Lamin等也不适合作为内参。

另外，我们还需要根据目的蛋白的大小选择合适的核内参，我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分 子量最好相差5KD以上，因此你需要根据你目的检测蛋白的分子量来选择合适的内参。PCNA的检测分子量大约在28kD，而Histone H3的检测条带大约在18kD，因此PCNA比较适合用于检测目标蛋白在较大的WB实验，而Histone H3则不适合用于13kD-23kD大小的目的蛋白内参。另外，虽然PCNA是最合适的核内参抗体之一，但是在某些条件下，一些影响增殖的因素会导致样品间PCNA含量的变化，就不适合作为内参。

一开始购买Abbkine的PCNA抗体是用来做WB的，效价挺高的。后来我们使用了组织块作为样品做共定位，我尝试使用该抗体对PCNA做定位，做免疫组织化学，WB和IHC效果都很不错。——中南民族大学生科院一客户

产品名称及描述	品牌	货号	产品说明
Anti-PCNA Mouse Monoclonal Antibody (1D7)	Abbkine	A01040	详情

另外，我们还需要考虑自己的需要，特别是实验应用上的需要。一般来说，应用类型越多，在使用过程中的选择余地就越大，而小鼠源的单克隆抗体一般在特异性、稳定性以及效价都要优于多克隆抗体。 另外，抗体的效价也是考察该抗体性价比的重要方面，也即相当于实际应用时的稀释比率。一个效价高的100μl PCNA抗体（假如其WB检测的稀释比率是1:5000，最终使用液相当于500ml），要比效价低的1ml的PCNA抗体（假如WB检测的稀释比率是 1:200，最终使用液相当于2ml）性价比更高。因此在选择抗体的时候，不但需要考虑抗体的量，还需要考虑抗体的效价，即不同应用的建议稀释比率。

为什么选择推荐Abbkine品牌的PCNA抗体？

供应PCNA抗体的品牌是比较多的，象Abcam、Santa Cruz、Cell Signaling、Sigma，甚至于Millipore、R&D、Novus、BD等都有相应的产品。下面是几个进口品牌的简单比较：

品牌	货号	2013年报价	规格	应用类型
	ab29	￥4418	100µg	WB, IP, IHC
	2586S	￥2997	100μl	WB, IF, IHC, FC
	SAB2502099	￥3299	100μg	WB, ELISA
	A01040	￥1800	200μl	WB, IHC

另外，一些国内的供货商也能提供分装的PCNA抗体，但是在品牌和质量保障上都有不足。国产分装的PCNA抗体在质量稳定性上有不足，并且经过分装以后，其效价也有损失。而原产于国内实验室的PCNA抗体有些具有较好的检测活性，但是在应用类型上有差距，并且在批次之间的稳定性上较难控制，而国内仅有的少量原产抗体也是多克隆抗体。如果您想买到一支性价比更高，同时也是原装进口品牌的PCNA核内参抗体，那Abbkine可能会是您的一个重要考虑选项之一。我们向您推荐Abbkine的PCNA核内参抗体Anti-PCNA Monoclonal Antibody (1D7)（货 号A01040）。

产品名称及描述	品牌	货号	产品说明
Anti-PCNA Mouse Monoclonal Antibody (1D7)	Abbkine	A01040	详情

该抗体单克隆抗体，克隆号为1D7。其抗原为人PCNA蛋白中兼具特异性和保守的一段序列，可用于小鼠、人以及大鼠样本的WB内参。另外，该抗体的效价非常高，WB实验推荐稀释比率为1:1000-1:10,000，甚至有客户报告更高的稀释比率。

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该PCNA内参抗体免疫组织化学的效果也很不错，是一款非常适合做免疫组化对细胞骨架进行染色定位的抗体产品。另外，也有客户报告使用该抗体用于组织的荧光染色，也取得了意外的效果。

Abbkine还提供大包装1ml以及更大规格定制的PCNA标签抗体，非常适合经常进行内参验证或校准的免疫学实验需求。为方便客户的使用， 上述产品，Abbkine均在中国备有现货。Abbkine针对中国市场，提供全球化的产品质量追踪和售后服务以及保障，如果您在使用过程中有任何问题， 请直接与其当地代理商艾美捷科技有限公司联系。

产品名称及描述	品牌	货号	产品说明
Anti-PCNA Mouse Monoclonal Antibody (1D7)	Abbkine	A01040	详情

美国Abbkine品牌是一家提供高性价比免疫学和细胞学科研产品及解决方案的品牌，艾美捷将其引入中国，作为其中国区域代理，将为客户提供最具性 价比的常规免疫学试剂，如各种标签抗体、内参抗体、常规一抗以及全系列二抗，抗体检测底物以及相关试剂盒等。同时我们作为多家国际知名品牌的的中国代理或 区域代理，艾美捷能为您提供系列的实验室解决方案。如果您对上述产品感兴趣，请致电免费客户专线400-6800-868到艾美捷科技有限公司垂询相关的产品信息及完整实验解决方案。