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在WesternBloting实验中,也许存在总蛋白浓度测定不精确,或许蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作差错;这些差错可以经过测定每个样品中实际转到膜上的内参,比方内参GAPDH的含量来进行校对。当然除了GAPDH抗体,β-Actin抗体、β-Tubulin抗体等也是最常见的内参抗体。GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)是参加糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基构成,分子量146kDa,检查条带大约在36kDa。GAPDH基因简直在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。
选择合适的GAPDH抗体显得尤为重要,首先GAPDH的WB检测条带大约为36kDa,因此对于一些待检测分子量大于40kDa或者小于30kDa的目的蛋白尤为合适。一般来说,国产的抗体在质量稳定性、效价等方面存在不足,但是进口品牌如Abcam、Millipore、CST等价格偏高,一般在¥3000/100ul左右。下面我们为您推荐三款GAPDH原装进口抗体。Abbkine的Anti-GAPDH Monoclonal Antibody(货号A01020)是小鼠源的单抗,其效价很高,厂商推荐的WB起始稀释比率为1:1000,实际应用过程中,有使用1:10000或更高的报告,远远高于此稀释比率,说明其免疫效价很高,另外,其检测种属也很多,包括人、牛、猪、小鼠、大鼠等。上图为Abbkine的Anti-GAPDH MonoclonalAntibody(货号A01020)在不同细胞系内WB的检测结果。
Abbkine的HRP, Anti-GAPDH Mouse Monoclonal Antibody (2B5) (货号A01025)则是一款HRP直标的小鼠源单克隆GAPDH抗体,由于是HRP直接标记,因此不会受到二抗的干扰,在一些IP应用中非常合适,可有效排除IP-WB时的重链干扰。下图为Abbkine的GAPDH Monoclonal Antibody(货号A01020)抗体在石蜡包埋、福尔马林固定的切片上的应用。
更多GAPDH内参抗体以及其他如Actin、Tubulin等其他内参抗体,请电话027-59626688。
Abbkine品牌是一家提供高性价比免疫学和细胞学科研产品及解决方案的品牌,目前已引入中国,艾美捷科技作为作为总代理,将为客户提供最具性价比的常规免疫学试剂,如各种标签抗体、内参抗体、常规一抗以及全系列二抗,抗体检测底物以及相关试剂盒等。同时我们作为多家国际知名品牌的的区域代理,能为您提供系列的实验室解决方案。如果您对上述产品感兴趣,请致电027-59626688到武汉艾美捷科技有限公司垂询相关的产品信息及完整实验解决方案。
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